ЛЕКЦИЯ №3 Токсическое действие неорганических веществ Группа веществ, изолируемых минерализацией («Металлические яды») Группа веществ, изолируемых экстракцией водой в сочетании с диализом
Cлайд 2
Биопроба (кровь, моча, волосы, ногти, ткани органов) Предварительная обработка Удаление фоновых веществ, концентрирование определяемых веществ, обезвоживание, измельчение, удаление белков и липидов Пробоподготовка Без «изолирования» - минерализации химическими способами (ААС) и (АЭС-ИСП), мультиэлем. методы «Изолирование» - процесс выделения неорганических компонентов из биологического материала, его очистки от эндогенных веществ, концентрирование в аналитической пробе. 2. Разложение биологической пробы 2.1. разложение легко- растворимых соединений в воде 2.2. разложение трудно- растворимых соединений в замкнутых сосудах при высоком давлении 2.3. разложение мало- растворимых соединений при обычном давлении Группа веществ, изолируемых минерализацией
Cлайд 3
«СУХАЯ», в т.ч. озоление на воздухе и в атмосфере О2 или иных реакционных газов, термическое разложение или пиролиз (не выше 400-500 0С) «МОКРАЯ», HNO3, HClO4, H2SO4 и др. кислотами в присутствии других окислителей (например H2O2) или Kt Минерализация кислотами МИНЕРАЛИЗАЦИЯ Основные процессы: БЕЛОК + ЖИРЫ (ЛИПИДЫ) + УГЛЕВОДЫ + …. Биообъект CO2↑ + CO ↑ + H2O ↑ + NH3 ↑ + N2 ↑ + NO2 ↑ + NO ↑
Cлайд 4
2. Реагент: H2SO4 + O2 Биопроба – Раст. Возможные потери Pb, Se 3. Реагент: HNO3 Быстрое озоление в спец. контейнерах (бомбах, автоклавах), тефл. сосуды при 3500С в микроволновой печи. Возможные потери Co, Zn, Mn 1.Реагент: H2SO4 + HNO3 Биоматериал: Растит. Потери: As, Se,Hg и др. Э а) H2SO4 – не только окислитель, но и водоотнимающий агент б) снижение влажности усиливает окислительные свойства H2SO4 и HNO3 H2SO4 H2O2 + SO2 «О» + Н2О HO – NO2 HO – NO2 Kt HNO2 2 NO2 ↑ + Н2О2 Н2О «О» Kt HNO2 появляется при част. разложении
NO + NO2 + 2H2SO4 → + H2O HOH Kc HNO2 + H2SO4 KC = [HSNO5] ·[H2O] [H2SO4]·[HNO3] В соответствии с принципом Ле Шателье-Брауна, если удалить HNO2, реакция денитрации пойдет в одном направлении – слева направо Методы удаления окислителей из минерализата - ДЕНИТРАЦИЯ
5 типов веществ в зависимости от их поведения в живых системах: Необходимые. Стимуляторы. Инертные. Терапевтические. Токсичные.
Cлайд 9
Cлайд 10
Содержание металлов в организме человека (в весовых %) Биогенные металлы Элемент Содержание (весовые %) Ca Na K Mg 1.4 0.63 0.26 4×10-2 Энзим-необразующие Fe Zn Cu 5×10-3 3×10-3 1×10-4 Главные энзим-образующие Mn Mo Ni Cr V Co W 2×10-5 2×10-5 4×10-5 4×10-5 3×10-5 2×10-5 ? Более редкие энзим-образователи
Cлайд 11
Основные пути поступления металлов в организм: Кожа, дыхательные пути, ЖКТ. Метаболизм, распределение: Кровь, печень, почки, др. органы. Основные пути выведения: Пот, волосы, моча, экскременты. Механизм токсичности металлов
Cлайд 12
Механизм токсичности металлов 1.Проникновение элемента в липидорастворимой форме 2.Проникновение элементов в комплексе с белком а) Ag+ + RS-H → RS-Ag↓ + H+ б) 2 МТ(SH)x + x Cd2+ (Cu, Zn, Hg, Ag)→ металлотионин →МТ(S-Cd-S)xМТ + 2х Н+ в) Транспорт ионов в виде комплексов с эндогенными лигандами по транспортным (структуроподобным системам) г) Перенос ионов в свободной форме Рис. Использование кальциевых каналов для транспорта ионов Pb2+ (гипотетическая модель) 3. Комплексообразование с биолигандами, белками, в том числе ферментами и конкурентное замещение ионов металлов – кофакторов ферментов
Cлайд 13
Обмен меди в организме человека Поступление меди с пищей (2-4 мг/сутки) Выведение с калом (до 90%) пул меди всасывание (40%) выделение с желчью сывороточный альбумин (плазма) медьсодержащие белки Cu-металлотионеин (депо в печени) церулоплазмин выведение с мочой (до 90%) выделение с потом, выдыхаемым воздухом
Cлайд 14
Обмен марганца в организме человека Поступление с пищей Выведение с калом (~100%) абсорбция (1-4%) кости плазма, глобулин, трансманганин Мn-супероксиддисмутаза пируваткарбоксилаза Выведение с мочой (~0%) желчь
Cлайд 15
Поступление с пищей Выведение с калом (98- 99%) всасывание (1-2%) Обмен хрома в организме человека печень, сыворотка крови ФГТ, мышцы Выведение с мочой (~1 мкг/сутки)
Cлайд 16
Выведение с калом (70-80%) Обмен кальция в организме человека Поступление с пищей и водой (500-1500 мг/сутки) всасывание (20-30%) костная ткань (99%) паратгормон сывороточный Са (свободный) 60% связанный с белком Са 40 % почки 1,25 ди-ОН-витамин Д реабсорбция паратгормон выведение с мочой (~200мг/сутки)
Cлайд 17
Поступление с пищей Выведение с калом (70- 80%) всасывание (20-30%) Обмен цинка в организме человека фитаты пищевые волокна Fe2+,Ca2+, Cu2+ Pb2+, Cd2+ - + белок пул цинка Zn-содержащие ферменты Zn-металлотионеин (депо в печени) выделение с поджелудочной железой тионеин цинк плазмы выделение с мочой и перспирацией выделение со спермой у мужчин (до 1-3 мг) 20 – 30 %
Cлайд 18
Содержание некоторых элементов в печени человека (на 100 г сырого органа) Элемент Количество, в мг Fe 95-163 Zn 5,4-14,5 Cd 0,21-0,42 Cu 0,71-1,0 Mn 0,17-0,20 As 0,01 Ag 0,005 Cr 0,001-0,010 Hg 0,002-5,62 Pb 0,130
Cлайд 19
Содержание некоторых элементов в органах человека (на 100 г органа) Знак минус означает, что данный элемент дробным методом не обнаруживается Печень Почка Головной мозг Матка Cu 0,56-1,2 0,24-0,4 0,31-0,94 - Cd 0,64-6,78 1,32-8,48 - - Zn 2,9-6,7 1,8-6,2 - - Mn 0,13-0,4 0,06-0,28 - 0,04-0,16 Hg 0,01 (-) 0,038 (-) - -
Cлайд 20
Мишени токсического воздействия металлов Влияние формы химического элемента на мишень
Cлайд 21
Мишени токсического воздействия металлов
Cлайд 22
Мишени токсического воздействия металлов
Cлайд 23
Мишени токсического воздействия металлов
Cлайд 24
ХТА проводят: 1. Когда материалы дела указывают на возможность отравления этими веществами. 2. В случае положительных результатов предварительных проб на кислоты, щелочи и другие соединения в исследуемых объектах Изолирование осуществляют методом водной экстракции (настаивания с водой). Для очистки водных вытяжек из исследуемых объектов применяют методы фильтрования, центрифугирования, диализа МЕТОДИКА измельчение биологического материала вытяжка в воде (τ = 1-2 часа) 3а. фильтрация или центрифугирование 3б. диализ 4. выпаривание диализата 5. анализ диализата Химико-токсикологическая характеристика неорганических веществ (кислоты, щелочи, их соли)
Cлайд 25
Минеральные кислоты Анализ диализата Ind отгон 2) An- 1) рН Универсальный индикатор
Cлайд 26
Реакции с ВаCl2 с Pb(CH3COO)2 с родизонатом натрия + BaCl2 бесцветный красный бесцветный Серная кислота Особенности ХТА: 1. Выделение серной кислоты из биологического материала: добавление С2Н5ОН (кислота – растворяется, соли – нет) 2. Отгонка серной кислоты 2 H2SO4 + Cu → H2SO3 + CuSO4 + H2O H2SO3 → SO2 + H2O SO2(вода) + J2+ 2Н2О → 2H2SO4 + 2HJ
Cлайд 27
Азотная кислота Особенности ХТА: 1. Выделение азотной кислоты из биологического материала Отгонка азотной кислоты из диализата - необходима отгонка – досуха - ускоряют отгонку добавлением Cu Реакции 1. с дифениламином 2. с бруцином 3. окрашивание шерсти 4. удаление нитритов из исследуемых растворов Удаление азотистой кислоты основано на разложении этой кислоты мочевиной O=C(NH2)2, сульфаминовой кислотой HOSO2NH2, солями аммония, азидом натрия NaN3 и др Соляная кислота Особенности ХТА: 1. Выделение соляной кислоты из биологического материала Отгонка соляной кислоты из диализата - необходима отгонка – досуха - предварительный анализ диализата на серную кислоту Реакции 1. с нитратом серебра 2. с хлоратом калия
Cлайд 28
Едкие щелочи (гидроксид калия, гидроксид натрия) и аммиак Гидроксид калия Реакции 1. с гидротартратом натрия 2. с гексанитрокобальтатом натрия Гидроксид натрия Реакции 1. с гидроксостибиат калия 2. с цинк-уранилацетатом Аммиак Особенность ХТА: предварительное обнаружение сероводорода
Cлайд 29
Нитриты 1. с сульфаниловой кислотой и β- нафтолом 2. с реактивом Грисса
Cлайд 30
Нитриты Нитрозамины В кислой среде нитриты дают азотистую кислоту, а она, взаимодействуя со вторичными и третичными аминами, образует канцерогенные нитрозамины: Наиболее часто в пищевых продуктах обнаруживаются нитрозодиметиламин и нитрозодиэтиламин. Больше всего нитрозаминов встречается в копченых мясных изделиях, колбасах, приготовленных с добавлением нитритов, – до 80 мкг/кг, в соленой и копченой рыбе – до 110 мкг/кг. (В свежем мясе и рыбе нитрозамины не обнаруживаются или находятся в следовых количествах – менее 1 мкг/кг.) Из молочных продуктов нитрозамины обнаружены главным образом в сырах, прошедших фазу ферментации (до 10 мкг/кг). Из растительных продуктов в основном в солено-маринованных изделиях, Из напитков – в пиве, где суммарное содержание их может достигать 12 мкг/л.